原理與基本操作

 

　　賽默飛nanodrop紫外分光光度計(jì)的工作原理基于朗伯-比爾定律，這一定律描述了溶液對(duì)光的吸收與溶質(zhì)濃度之間的關(guān)系。儀器通過(guò)一個(gè)光源發(fā)出特定波長(zhǎng)的光束，穿過(guò)樣品后，檢測(cè)器測(cè)量透射光的強(qiáng)度。吸光度（A）可以表示為：

 

　　\[A=\log\left(\frac\right)\]

 

　　其中，\(I_0\)為入射光強(qiáng)度，\(I\)為透射光強(qiáng)度。通過(guò)測(cè)量吸光度，可以推算出樣品的濃度。

 

　　核酸和蛋白質(zhì)定量

 

　　在生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室中，核酸（DNA和RNA）和蛋白質(zhì)的定量是常見(jiàn)的應(yīng)用之一。通過(guò)測(cè)量不同波長(zhǎng)下的吸光度，可以準(zhǔn)確地確定這些生物分子的濃度。

 

　　1.核酸定量：

 

　　DNA和RNA在260nm波長(zhǎng)處具有最大吸收峰。通過(guò)測(cè)量260nm下的吸光度（A260），并利用標(biāo)準(zhǔn)曲線或已知的吸光系數(shù)，可以計(jì)算核酸的濃度。此外，通過(guò)測(cè)量A260/A280的比值，可以評(píng)估樣品的純度。例如，A260/A280比值為1.8-2.0通常表明DNA樣品較為純凈。

 

　　2.蛋白質(zhì)定量：

 

　　蛋白質(zhì)通常在280nm處有顯著吸收，這主要源于酪氨酸和色氨酸殘基。測(cè)量A280可以直接用于蛋白質(zhì)定量。然而，由于蛋白質(zhì)的復(fù)雜性，通常還會(huì)結(jié)合其他方法，如BCA法、Bradford法等，確保結(jié)果準(zhǔn)確。

 

　　酶動(dòng)力學(xué)研究

 

　　在酶動(dòng)力學(xué)研究中也是重要的工具。通過(guò)監(jiān)測(cè)底物或產(chǎn)物在特定波長(zhǎng)下的變化，可以實(shí)時(shí)觀察酶反應(yīng)的進(jìn)程，計(jì)算酶的動(dòng)力學(xué)參數(shù)，如Km和Vmax。例如，在β-半乳糖苷酶催化反應(yīng)中，ONPG（鄰硝基苯基-β-D-半乳糖苷）作為底物，其水解產(chǎn)物在420nm處具有吸收峰，通過(guò)測(cè)量吸光度的變化，可以精確監(jiān)控反應(yīng)速度。

 

　　光譜特性分析

 

　　還用于測(cè)定各種生物分子和化合物的光譜特性。每種物質(zhì)都有其光譜圖，通過(guò)與已知光譜庫(kù)的比較，可以進(jìn)行物質(zhì)的定性分析。例如，輔酶NADH和NADPH在340nm處有特征吸收峰，通過(guò)光譜分析，可以區(qū)別并定量這些輔酶。

 

　　藥物檢測(cè)與分析

 

　　在藥物研發(fā)和質(zhì)量控制中，賽默飛nanodrop紫外分光光度計(jì)是一種重要的分析工具。它可以快速測(cè)定藥物在不同溶液中的溶解度、穩(wěn)定性和含量。例如，阿司匹林在紫外區(qū)域有特定的吸收峰，通過(guò)測(cè)量其吸光度，可以迅速評(píng)估藥物的純度和含量。

 

　　細(xì)胞培養(yǎng)和活力檢測(cè)

 

　　賽默飛nanodrop紫外分光光度計(jì)在細(xì)胞生物學(xué)中也有廣泛應(yīng)用。細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，常需要測(cè)定培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和代謝產(chǎn)物的濃度。例如，通過(guò)測(cè)量葡萄糖和乳酸在特定波長(zhǎng)下的吸光度變化，可以了解細(xì)胞的代謝狀態(tài)。同時(shí)，MTT和XTT等細(xì)胞活力檢測(cè)方法，也依賴于光度計(jì)來(lái)測(cè)定生成的有色產(chǎn)物的吸光度。

 

　　環(huán)境樣品分析

 

　　還可用于環(huán)境樣品的分析，如水質(zhì)監(jiān)測(cè)和污染物檢測(cè)。通過(guò)測(cè)量水樣中有機(jī)物或重金屬離子的吸光度，可以評(píng)估水體污染程度。例如，酚類化合物在特定波長(zhǎng)下具有吸收峰，通過(guò)光度法可以檢測(cè)水中酚類污染物的濃度。